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蛋白酶K在具体实验中的应用点击次数：1034 更新时间：2020-12-24

　　蛋白酶K经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体 DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。
 
　　蛋白酶K配制标准：20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K)：将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K*溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
 
　　酶解与核酸结合的组蛋白，使 DNA游离在溶液中，随后用不同方法进行 抽提，除去杂质，收集DNA。EDTA等螯 合剂或SDS等去垢剂均不能使之失活。蛋 白酶K贮存液一般为10mg/ml或20mg/ml。 贮存于一20°C。蛋白酶K溶液为无色透明， 如出现沉淀就不能再使用。
 
　　蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理，它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用，以增加探针与靶核酸结合的机会，提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时，都会对细胞的结构有一定的破坏，导致组织切片的脱落，细胞核的消失，从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用，解决上述出现的问题，并能达到理想的染色效果。
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